Yazlık, Murat OnurVural, Mehmet RıfatVural, SevilTunç, Arda SelinMüştak, İnci BaşakKaya, UfukÖzöner, Özgür2024-12-242024-12-242023https://search.trdizin.gov.tr/tr/yayin/detay/1233994https://hdl.handle.net/20.500.12604/417115.09.2023Pyometra, köpeklerde diöstrus döneminde gözlenen genellikle ölümle seyreden yangısal bir hastalıktır. On yaşından daha genç köpeklerin ortalama %19?unda gözlenebilmektedir. Multifaktöriyel bir etiyolojiye sahip olduğundan bütün etiyopatogeneziste açıklanamayan mekanizmalar bulunmaktadır. Bu projede yangısal faktörlerin düzenlenmesinde de görev alan aquaporin (AQP)?lerin Escherichia coli (E. coli) nedenli oluşan açık ve kapalı serviks pyometra olgularında ovaryum, uterus ve serviks dokusundaki gen ekspresyon düzeylerinin siklusun anöstrus ve diöstrus dönemindeki sağlıklı köpeklere kıyasla değişimleri belirlenmiştir. Ayrıca, sağlıklı ve pyometralı köpeklerde dokudaki AQP ekspresyonları ile serum ve doku superoksid dismutaz (SOD), glutatione peroksidaz (GPx) gibi antioksidan enzimler ile nitrik oksit (NO) ve lipopolisakkarit (LPS) düzeyleri, serum progesteron düzeyi ve lokal hormon reseptör ekspresyonları ile ilişkisi belirlenmiştir. Dahası enfeksiyona neden olan E.coli virulens gen dağılımlarına göre uterus dokusundaki AQP ekspresyon değişimlerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya toplamda 48 adet dişi köpek dahil edilmiştir. Kontrol grubunu rutin kısırlaştırma amacıyla kliniğe getirilen sağlıklı 24 köpek oluşturmuştur (Diöstrus dönemi n:12; Anöstrus dönemi n:12). Çalışmanın deney grubunu E.coli nedenli pyometradan muzdarip köpekler oluşturmuştur (Açık serviks n:12; Kapalı serviks n:12). Çalışmaya dahil edilen köpeklerin tamamına rutin ovariyohisterektomi operasyonu gerçekleştirilmiştir. Bakteriyoloji, ovaryum, uterus ve serviksteki gen ekspresyonları ile kan ve uterus dokusundaki enzim ve toksin düzeylerini amacıyla örnekler toplanmıştır. Doku örnekleri histopatolojik ve immunohistokimyasal incelemelerden geçirilerek doku düzeyinde AQP ve lokal hormon reseptörleri antijenlerinin varlığı semikantitatif olarak belirlenmiştir. Gen ekspresyon düzeylerini belirlemek için toplanan örnekler RNA later solüsyonuna konularak -80°C?de analiz gününe kadar saklanmıştır. Total RNA izolasyonu modifiye edilmiş TRIzol metoduna göre yapılmıştır. Köpeklerde ovaryum, uterus ve serviks dokularında ER, PGR, OTR, AQP1, AQP2, AQP3, AQP5 ve AQP9 genlerinin ekspresyon seviyelerinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla GAPDH ve RPS15 housekeeping genleri kullanılmış ve Primer-Blast (NCBI) ile Primer 3 Plus programları aracılığıyla köpek türünde hedef genlerin amplifikasyonu için spesifik Forward ve Reverse primer dizileri tasarlanmıştır. Real Time PCR?da hedef genler örneklerde 3 tekrarlı olacak şekilde çalışılmıştır. Genlerin amplifikasyonunda SYBR Green I boya içeren kit kullanılmıştır. Virülens genlerin belirlenmesi amacıyla konvansiyonel PCR yöntemi kullanıldı. Serum progesteron, LPS, SOD, GPx ve NO düzeyleri antikoagulansız tüplere alınan kan örneklerinin santrifüjü sonrası elde edilen serumdan ölçülmüştür. Doku ve serumdaki antioksidan aktivite, toksin düzeyleri ve serum progesteron değerleri ticari ELİSA kitleri kullanılarak belirlenmiştir. Pyometra olgularında ovaryum, uterus ve serviks dokusunda AQP ekspresyon seviyelerinin değişim gösterdiği; pyometraların açık veya kapalı serviks tipinde olmasına göre uterus dokusunda AQP ekspresyonlarının farklılaştığı; izole edilen E.coli?lerde virülens genlerin bulunması durumunda AQP?lerin uterus dokusundaki ekspresyonlarında farklılıklar gözlenebileceği; pyometralı köpeklerde kanda artan LPS düzeyinin uterus AQP ekspresyonlarıyla ilişkili olduğu; köpeklerde pyometra olgularında serviksin açılma mekanizmasında AQP?lerin rol alabileceği; SOD, GPx ve NO düzeylerinin uterus ve serviks dokusundaki bazı AQP ekspresyonlarından ile ilişkili olduğu belirlenmiştir.trinfo:eu-repo/semantics/openAccessKöpekpyometragen ekspresyonuantioksidan enzimAquaporinProject01831233994